Результат бактериологического исследования. Бактериологические исследования. Материал для бакпосева

21.02.2019

Бактериологический посев - один из видов лабораторного исследования, основанный на анализе биологического материала посредством его высева на специальные питательные среды. По результатам бакпосева выявляется наличие/отсутствие условно-патогенных и патогенных микроорганизмов определенного типа с целью дальнейшего изучения их физико-химических свойств и определения схемы лечения диагностированных инфекционных заболеваний.

Ценность данного способа исследований заключается в том, что он позволяет не только обнаружить болезнетворные бактерии, но и установить степень их чувствительности к препаратам антибактериального действия. Иными словами, на основании анализа можно безошибочно подобрать комплекс медикаментозных средств для проведения успешной терапии.

Основными плюсами бактериологического посева можно назвать следующие:

Высокая точность исследований. В отличие от ИФА (иммуноферментный анализ), ПЦР (полимеразная цепная реакция), вероятность получения ложноотрицательных и ложноположительных результатов практически равна нулю.
В качестве биологического материала возможно использование абсолютно любой жидкости, выделяемой из организма человека.
Разработка атибиотикограммы. То есть, установление степени воздействия на выявленные микробы того или иного антибиотика, что позволяет проводить лечебные назначения с максимально высокой точностью.

Недостатки метода

К минусам бакпосева можно отнести такие факторы:

Сложность выполнения процедуры и необходимость соблюдения специфических требований к забору материала.
Длительность ожидания результат исследований.
Наличие специальной лаборатории, а также соответствующей квалификации медперсонала, задействованного в проведении анализа.

Цель проведения бактериологического посева

Метод бакпосева достаточно распространен в медицинской практике, применяясь для диагностики заболеваний в самых разных областях медицины: хирургии, онкологии, гастроэнтерологии, отоларингологии и т. д. В гинекологии и урологии данный вид лабораторного анализа используется для исследования микрофлоры в целях диагностики следующих возбудителей:

микоплазмоза и уреаплазмоза;
трихомониаза;
кандидоза (молочницы);
хламидиоза.

По итогам исследования можно не только выявить наличие патогенных бактерий, но и определить их количественных состав. Что, в свою очередь, дает понимание того, на какой стадии прогрессирует болезнь, и скоординировать дальнейшее лечение.

Помимо мазка из половых органов для бакпосева используется также и ряд других разновидностей биологического материала. Например:

Кровь - для проверки на стерильность, при внутрисосудистых инфекциях, эндокардите.
Слизистая из носа, горла - для выявления вирусов и бактерий, провоцирующих риниты, синуситы, ангины и другие ЛОР-заболевания.
Кал - для диагностирования дисбактериоза и прочих нарушений желудочно-кишечного тракта.
Желчь - при наличии воспалительных заболеваний печени, поджелудочной железы, желчного пузыря.
Мокроты - для определения инфекций дыхательных путей, в частности, туберкулеза легких.
Слизистая глаз - при развитии гнойных воспалений глаз и других офтальмологических патологий.
Кожный жир - для выявления стафилококков, грибков и прочих представителей патогенной флоры, скапливающихся в эпителиальном слое кожи лица.

Механизм проведения

Процедуру лабораторного исследования условно можно разделить на несколько этапов:

Забор материала и помещение его на специальные питательные среды. Тип используемой среды зависит от цели проведения бакпосева (выращивание одного определенного возбудителя или расшифровка бактериальных культур с целью дальнейшего построения антибиотикограммы). При необходимости жидкие среды могут заменяться впоследствии на твердые поверхности, что позволяет проводить более точную идентификацию колоний бактерий.
Помещение питательной среды в специальное оборудование (термостат), где создаются соответствующие условия для роста и размножения патогенных возбудителей. Имеют значение показатели влажности воздуха, температуры, освещения и т. д.
Подкрашивание материала различными реагентами для лучшего осмотра и дальнейшего анализа. За счет красителей бактерии меняют свою расцветку и становятся более заметными на общем фоне питательной среды.
Оценка выросших колоний по определенным показателям: плотность, форма, расцветка, химический состав и т. д.

Важно! Одним из важнейших условий проведения бактериологического посева является соблюдение абсолютной стерильности помещения лаборатории, а также используемой посуды и инструментов. Для переноса материала на среду применяются такие приспособления как стеклянная палочка, бактериальная петля, пастеровская пипетка.

В данном видео, на примере бактериологического анализа мочи, рассказывается о принципе проведения бакпосева.

Расшифровка бакпосева

Результат анализа оценивается по нескольким показателям, учитывающим не только качественный фактор (подтверждение наличия бактерий-возбудителей в среде), но и количественный - то есть, степень концентрации патогенных микроорганизмов в исследуемом материале. Для подсчета количества микробных клеток используется понятие колониеобразующей единицы (КОЕ), по которому можно определить уровень насыщенности бактериями изучаемого образца.

Выделяют 4 степени роста возбудителей:

Первая - скудный рост бактерий на жидкой питательной среде и отсутствие роста на твердой среде. Такой результат не считается отклонением от нормы.
Вторая - рост бактерий на твердой среде до 10 колоний. Свидетельствует не о наличии болезни, а скорее о загрязненности лабораторных принадлежностей для исследования.
Третья - рост бактерий на твердой среде в пределах 10-100 колоний.
Четвертая - более 100 колоний.

В заключении, выдаваемом на руки пациенту, результаты бакпосева обозначаются следующим образом:

указывается название выявленного возбудителя на латинском языке (например, Trichomonas vaginalis - трихомонада);
прописывается концентрация микроорганизма, выращенного в условиях питательной среды (норма - до 10 3 КОЕ/мл, ненорма - от 10 5 КОЕ/мл);
указывается характер среды: флора условно-патогенна, патогенная.

Одновременно с определением концентрации бактерий производится анализ их чувствительности к антибиотикам. Наличие положительной реакции на тот или иной антибактериальный препарат обозначается символом «S», отрицательной - «R».

Правила проведения бакпосева на микрофлору у женщин

Перед сдачей анализа необходимо учесть ряд обязательных требований в части соблюдения правил личной гигиены, а также непосредственно механизма забора биологического материала. Заключаются они в следующем:

за сутки до процедуры избегать половых контактов любого вида (анальный, оральный, вагинальный);
не проводить спринцевания, ванночки, примочки на половые органы и прочие антисептические процедуры;
отказаться от применения вагинальных свечей, таблеток;
мазок должен браться не ранее, чем через 2 недели после менструации;
за месяц до анализа исключить прием антибиотиков;
не мочиться перед забором материала на протяжении 2-х часов.

Для исследования могут использоваться заборы из влагалища, мочеиспускательного канала, шейки матки, цервикального канала. Перед началом процедуры делается тщательная обработка половых органов, при необходимости вход в вагину закрывается ватным тампоном. При анализе мочи берется ее средняя порция, помещаемая затем в стерильную баночку. Моча должна быть обработана в течение 2-х часов после забора и храниться при температуре не выше 20°С.

Правила проведения бакпосева на микрофлору у мужчин

В качестве материала для исследования может использоваться эякулят (сперма), кровь, моча, секрет простаты. Для получения максимально точного результата мужчинам следует придерживаться таких требований перед сдачей анализа:

воздержаться от сексуальных контактов за 1-2 перед тестированием на бакпосев;
исключить прием антибиотиков за 3-4 недели до сдачи анализа;
не мочиться за 4-5 часов до взятия пробы;
тщательно вымыть половые органы и сменить нижнее белье.

О любых изменениях в самочувствии следует незамедлительно сообщать врачу во избежание получения некорректных результатов анализа.

Бакпосев при беременности

Любая бактериальная инфекция, «дремлющая» в организме женщины, может отрицательно повлиять на течение беременности, привести к заражению плода, а в некоторых случаях даже спровоцировать выкидыш на ранних сроках. Чтобы обезопасить себя и будущего ребенка от различных патологий, необходимо осознанно подходить к планированию зачатия и при необходимости проводить соответствующую антибактериальную терапию.

Среди показаний для проведения бакпосева выделяют следующие:

наличие воспалительных заболеваний половых органов и мочеполовой системы;
выявление причин невынашиввания при предварительном диагнозе - бесплодие;
диагностика воспаления предстательной железы (у мужчин);
подготовительные действия к зачатию ребенка;
выбор правильной схемы лечения при наличии мочеполовых инфекций;
частая смена половых партнеров и пренебрежение механической контрацепцией (презерватив);
внематочная беременность (наступившая или присутствовавшая в прошлом).

Серьезную опасность для здоровья женщины, особенно в период беременности, представляет заболевание уреаплазмозом. Поскольку чаще всего оно протекает бессимптомно, вызывая впоследствии ряд серьезных осложнений (эндометрит, воспаление матки и т. д.), то своевременное диагностирование инфекции помогает провести необходимую терапию и снизить риск инфицирования ребенка в процессе вынашивания и родов.

Сроки готовности

Сроки готовности анализа зависят от вида исследуемого материала и могут варьироваться от 3 до 14 дней. При взятии мазка из урогенитального тракта продолжительность теста занимает в среднем 7 дней. Посевы на микрофлору (у мужчин и женщин) длятся 5-8 дней. Предварительный результат можно получить не ранее 3-х дней поле сдачи мазка.

При относительной длительности и специфики проведения бактериологического посева на сегодняшний день данный вид лабораторного исследования является одним из самых точных и эффективных способов диагностики, позволяющий не только определить тип болезнетворных организмов, но и спланировать схему борьбы с выявленным заболеванием.

Исследование бактерий имеет большое практическое значение для человека. На сегодняшний день открыто большое количество прокариот, которые отличаются друг от друга по патогенности, области распространения, форме, размерам, количеству жгутиков и другим параметрам. Чтобы детально изучить данный штамм, применяется бактериологический метод исследования.

Какие существуют методы клеток?

Чтобы определить, являются ли бактерии патогенными, проводят исследование культуры различными способами. Среди них:

1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологический метод.

3. Биологический метод.

Бактериоскопический и бактериологический основаны непосредственно на работе с клетками прокариот, когда биологический анализ требуется для изучения влияния таких клеток на живой организм подопытных животных. По степени проявления тех или иных признаков заболевания ученый может сделать вывод о наличии или отсутствии патогенных бактерий в пробе, а также естественно их размножить в организме животного для получения их культуры и использования в других работах.

Бактериологический метод исследования отличается от бактериоскопического. В первом для анализа используется специально подготовленная культура живых прокариот, когда во втором проводится работа с мертвыми или живыми клетками на предметном стекле.

Этапы бактериологического метода исследования. Микробиология

Принцип изучения свойств бактериальной культуры может пригодиться как для ученых-микробиологов, которые поставили цель исследовать прокариотические клетки, так и для лаборантов, задача которых заключается в установлении патогенности или непатогенности бактерий, а затем диагноза пациента.

Методика изучения бактерий делится на три этапа:

1. Выделение бактерий из первоначальной пробы.

2. Высевание бактерий и выращивание изучение ее свойств.

3. Детальное исследование бактериальных клеток.

Первый этап

Проба, или мазок, берется со свободной поверхности среды или у пациента. Таким образом мы получаем «коктейль» из множества видов бактерий, которые должны высеять на питательную среду. Иногда появляется возможность выделить сразу необходимые бактерии, зная их очаги распространения в организме.

Через двое-трое суток отбираются нужные колонии и высеваются на твердые среды чашек Петри с помочью стерильной петли. Во множестве лабораторий работают с пробирками, где может находиться твердая или жидкая питательная среда. Так и проводится бактериологический метод исследования в микробиологии.

Второй этап

После получения отдельных колоний бактерий проводится непосредственный макро- и микроанализ. Измеряются все параметры колоний, определяется цвет и форма каждой из них. Нередко проводится подсчет колоний на чашке Петри, а затем в исходном материале. Это имеет значение при анализе патогенных бактерий, от числа которых зависит степень заболевания.

Бактериологический метод исследования, 2 этап которого заключается в изучении отдельных колоний микроорганизмов, может быть сопряжен с биологическим способом анализа бактерий. Еще одна цель работы на этом этапе - увеличить количество исходного материала. Это можно сделать на питательной среде, а можно провести эксперимент в естественных условиях на живых подопытных организмах. Патогенные бактерии будут размножаться, и в результате кровь будет содержать миллионы клеток прокариот. Из взятой крови легко приготовить необходимый рабочий материал бактерий.

Третий этап

Самая важная часть исследования - это определение морфологических, биохимических, токсигенных и антигенных свойств культуры бактерий. Работа ведется с заранее «очищенными» культурами на питательной среде, а также с препаратами (зачастую окрашенными) под микроскопом.

Установить принадлежность патогенных или условно-патогенных бактерий к той или иной систематической группе, а также определить их устойчивость к лекарствам позволяет бактериологический метод исследования. 3 этап - антибиотики, т. е. анализ поведения клеток бактерий в условиях содержания лекарственных препаратов в окружающей среде.

Исследование устойчивости культуры к антибиотику имеет важное практическое значение, когда необходимо прописать для конкретного пациента необходимые, а главное, действенные препараты. Здесь и может помочь бактериологический метод исследования.

Что такое питательная среда?

Для развития и размножения бактерии должны находиться в заранее подготовленных По консистенции они могут быть жидкие или твердые, а по происхождению - растительные или животные.

Основные требования к питательным средам:

1. Стерильность.

2. Максимальная прозрачность.

3. Оптимальные показатели кислотности, активности воды и других биологических величин.

Получение изолированных колоний

1. Метод Дригальского. Он заключается в том, что на бактериальную петлю наносится мазок с различными видами микроорганизмов. Этой петлей проводят по первой чашке Петри с питательной средой. Далее, не меняя петлю, методом остаточного материала проводят по второй и третьей чашкам Петри. Так, на последних образцах колонии бактерии будут засеваться не слишком плотно, тем самым упрощается возможность найти необходимые для работы бактерии.

2. Метод Коха. В нем используются пробирки с расплавленной питательной средой. Туда помещается петля или пипетка с мазком бактерий, после чего содержимое пробирки выливается на специальную пластинку. Агар (или желатин) застывает через какое-то время, а в его толще легко обнаружить нужные колонии клеток. Важно перед началом работы развести смесь бактерий в пробирках, чтобы концентрация микроорганизмов не была очень большой.

Этапы которого основаны на выделении нужной культуры бактерий, не обходится без этих двух способов нахождения изолированных колоний.

Антибиотикограмма

Визуально реакцию бактерий на препараты можно заметить двумя практическими способами:

1. Метод бумажных дисков.

2. Разведение бактерий и антибиотика в жидкостной среде.

Метод бумажных дисков требует наличия культуры микроорганизмов, которые были выращены на твердой питательной среде. На такую среду кладут несколько бумажек округлой формы, пропитанных антибиотиками. Если препарат успешно справляется с нейтрализацией бактериальных клеток, после такой обработки останется участок, лишенный колоний. Если же реакция на антибиотик отрицательная, бактерии выживут.

В случае использования жидкой питательной среды сперва готовят несколько пробирок с культурой бактерий разных степеней разведения. В эти пробирки добавляют антибиотики, и в течение суток наблюдают за процессом взаимодействия вещества и микроорганизмов. В конечном итоге получается качественная антибиотикограмма, по которой можно судить об эффективности препарата для данной культуры.

Основные задачи анализа

Здесь перечислены по пунктам цели и этапы бактериологического метода исследования.

1. Получить исходный материал, который будет использоваться для выделения колоний бактерий. Это может быть мазок с поверхности любого предмета, слизистой оболочки или полости органа человека, анализ крови.

2. на твердой питательной среде. Через 24-48 часов на чашке Петри можно обнаружить колонии бактерий разных видов. Отбираем по морфологическим и/или биохимическим критериям нужную и проводим уже с ней дальнейшую работу.

3. Размножение полученной культуры. Бактериологический метод исследования может опираться на механический или биологический способ увеличения численности культуры бактерии. В первом случае ведется работа с твердыми или жидкими питательными средами, на которых в термостате размножаются бактерии и образуют новые колонии. Биологический способ требует естественных условий увеличения численности бактерий, поэтому здесь микроорганизмами заражается подопытное животное. Через несколько суток в пробе крови или мазке можно обнаружить множество прокариот.

4. Работа с очищенной культурой. Чтобы определить систематическое положение бактерий, а также их принадлежность к возбудителям заболеваний, необходимо провести тщательный анализ клеток по морфологическим и биохимическим признакам. При исследовании патогенных групп микроорганизмов важно знать, насколько эффективно действие антибиотиков.

Это была общая характеристика бактериологического метода исследования.

Особенности проведения анализа

Главное правило проведения бактериологического исследования - это максимальная стерильность. Если идет работа с пробирками, посевы и пересевы бактерий должны проводиться только над нагретой спиртовкой.

Все этапы бактериологического метода исследования требуют использования специальной петли или пастеровской пипетки. Оба инструмента должны быть предварительно обработаны в пламени спиртовки. Что касается пастеровской пипетки, то тут перед термической стерилизацией необходимо отломать кончик пипетки пинцетом.

Техника посева бактерий тоже имеет свои особенности. Во-первых, при посеве на твердые среды проводят бактериальной петлей по поверхности агара. Петля, конечно же, уже должна иметь на поверхности образец микроорганизмов. Также практикуется посев внутрь питательной среды, и в этом случае петля или пипетка должны достичь дна чашки Петри.

При работе с жидкими средами используются пробирки. Здесь важно следить, чтобы жидкости не касались краев лабораторной посуды или пробки, а используемые инструменты (пипетка, петля) не дотрагивались до посторонних предметов и поверхностей.

Значение биологического метода исследования

Анализ пробы бактерий имеет свое практическое применение. Прежде всего бактериологический метод исследования может использоваться в медицине. К примеру, необходимо изучить микрофлору больного, чтобы установить правильный диагноз, а также выработать правильный ход лечения. Здесь помогает антибиотикограмма, которая покажет активность лекарственных препаратов против возбудителя заболеваний.

Анализ бактерий используется в лаборатории для определения таких опасных заболеваний, как туберкулез, возвратный тиф или гонорея. Также он применяется для изучения бактериального состава миндалин, полостей органов.

Бактериологический метод исследования можно использовать для определения загрязненности среды. По данным о количественном и качественном составе мазка с поверхности какого-либо предмета определяется степень заселенности данной среды микроорганизмами.

При соответствии полученных результатов по тестированию выделенной культуры с вышеуказанными данными полученный бактериальный штамм определяют как бактериальную культуру вида Yersinia enterocolitica.

В случае, если изучаемая бактериальная культура не типируется как бактерии вида Yersinia enterocolitica, возможен вариант повторного использования бактериальной суспензии со средой накопления, хранящейся в холодильнике при +4°С.

Оптимальным решением является постановка на исследование не одной пробы исследуемого образца, а целой серии проб.

Общие сроки бактериологического исследования материала - в пределах 7 суток.

Идентификация вида осуществляется биохимическими и серологическими методами.

Для проведения ускоренной диагностики заболевания можно использовать чумной бактериофаг. Бактериофаг Y. pestis выделяют из различных источников, включая ткани больного человека и животных, а также блох. Многие авторы связывают естественное быстрое угасание заболевания в очаге с наличием бактериофага. Его высокая специфичность и вирулентность для чумной палочки позволяют применять его для идентификации чумы внесением в исследуемый материал перед посевом либо по увеличению титра бактериофага в среде.

Для быстрого обнаружения также применяют AT, меченные флюоресцинами (позволяют обнаружить Y. pestis в различных объектах в течение первых 2 ч исследования), реакцию нейтрализации AT, реакцию преципитации в стандартных агаровых пластинках и метод ускоренного роста Y. pestis на средах обогащения.

Также разработаны методы, ускоряющие биологическую пробу, например, введение зараженным животным глюкокортикоидов или куриного желтка, что позволяет ускорить диагностику чумы в случаях снижения вирулентности или при применении малой заражающей дозы.

Основные биохимические свойства, дифференцирующие Y.pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, представлены в таблицах 15 и 16. Дополнительными признаками могут служить результаты реакции Фoгеса-Проскауэра: всегда отрицательные у Y. pseudotuberculosis и положительные при 22-28°С у Y. enterocolitica. В последнее время для выделения Y.enterocolitica из фекалий предложена селективная среда, содержащая цефсулодин, иргазан и новобиоцин (CIN-агар).

Питательные среды для культивирования иерсиний Фосфатно-буферный раствор (фбр)

Раствор А: KH 2 PO 4 – 9,08 г в 1,0 л дистиллированной воды; раствор Б: Na 2 HPO 4  2H 2 O – 11,87 г в 1 л дистиллированной воды (pH 7,6-7,8). 150 мл раствора А соединить с 850 мл раствора Б. Разлить по 5 мл в пробирки, стерилизовать при 1 атм. в течение 1 часа.

Буферно-казеиново-дрожжевая среда (бкд)

Гидролизат казеина средней степени расщепления – 2,0 мл (Дагестанский НИИ питательных сред); экстракт пекарских дрожжей – 5,0 мл; фосфатно-буферный раствор (pH 7,6-7,8) – до общего объема 1 л. Экстракт пекарских дрожжей: к 500 г дрожжей, предварительно размельченных до гомогенной массы в фарфоровой ступке в малом объеме дистиллированной воды добавить до 1 л дистиллята. Взвесь слить в колбу и кипятить в течение 60 минут на медленном огне при помешивании. Взвесь охладить при 5°С в течение 16-18 часов. Затем надосадочную жидкость слить и профильтровать через широкопористый бумажный фильтр. Приготовленный дрожжевой экстракт разлить во флаконы, простерилизовать под давлением 0,5 атм. 30 минут; хранить при температуре 5-8°С в течение 12 месяцев.

К 0,5 л фосфатно-буферного раствора добавить 2,0 г гидролизата казеина (предворительно подготовленного согласно указаниям на этикетке) и 5,0 мл экстракта дрожжей. Смешать встряхиванием, добавить фосфатно-буферный раствор до общего объема 1 л и проверить pH готовой среды (должен быть 7,6-7,8). Далее смесь разлить в пробирки по 5,0 мл и автоклавировать под давлением 0,5 атм. в течение 20 минут. Среду можно использовать в течение 7-10 суток при хранении в условиях холодильника.

Диагностика инфекционных заболеваний необходима для последующего проведения адекватной этиотропной терапии, направленной на уничтожение возбудителя патологического процесса. Выявление и идентификация патогенных микроорганизмов проводится при помощи различных методик лабораторной диагностики, одним из которых является бактериологическое исследование.

Бактериология как наука получила развитие в XIX веке благодаря внедрению бактериологических методик исследования.

Принцип и суть методики

Основной целью бактериологического исследования является выявление и последующая идентификация патогенного (болезнетворного) микроорганизма в исследуемом материале. Для этого проводится посев на специальные питательные среды (мясо-пептонный бульон, плотная среда агар), на котором при наличии возбудителя в материале через некоторое время вырастают колонии микроорганизмов. Их идентифицируют по микроскопическим (размер клеток, их форма, определенный цвет при окрашивании по Граму), биохимическим (способность расщеплять некоторые углеводы или
белки) и антигенным (взаимодействие с антителами к основным классам возбудителя) свойствам. В целом на проведение данной методики диагностики требуется от 48 до 72 часов, что достаточно долго (особенно при необходимости быстрого начала этиотропной терапии инфекционной патологии). Тем не менее данный вид лабораторной диагностики не теряет своей актуальности на сегодняшний день, так как является достоверным для большого количества инфекционных заболеваний.

Очень часто во время бактериологического исследования дополнительно проводится определение чувствительности выделенного патогенного микроорганизма к основным группам современных антибиотиков. Это дает возможность в последующем подобрать наиболее эффективную этиотропную терапию.

Когда проводится бактериологическая диагностика

Показанием к проведению бактериального исследования служит диагностика различных инфекционных заболеваний, к которым относятся:

Также данная методика может проводится для определения возбудителя гнойных процессов различной локализации. В первую очередь это необходимо для определения чувствительности выявленных микроорганизмов к антибиотикам, так как при развитии гнойного процесса возбудители часто являются устойчивыми к большинству антибиотиков.

Диагностика дисбактериоза при помощи бактериологического исследования дает возможность определить вид условно-патогенных микроорганизмов, а также их количество, на основании чего делается заключение о выраженности нарушения нормальной микрофлоры.

Материалом при бактериологическом исследовании служит моча, кровь, мазки из полости носа, уретры, влагалища, прямой кишки, кал, сперма у мужчин, мокрота. Выбор материала зависит от показаний к проведению данного метода лабораторной диагностики и локализации патологического процесса.

Расшифровка результатов

В большинстве случаев результат исследования основывается на 2-х показателях - факт наличия выявляемого
микроорганизма (положительный или отрицательный результат), а также количество бактериальных клеток на единицу объема исследуемого материала (данный показатель имеет место только при положительном результате). Численность бактерий выражается в количестве колониеобразующих единиц (КОЕ). Чем выше данный показатель, тем большее количество бактерий в исследуемом материале. Также результат может включать показатели чувствительности выявленного микроорганизма к антибиотикам. Он обычно состоит из списка основных классов антибактериальных средств (

Бактериологический посев – метод исследования биологического материала (кровь, моча, кал и пр.), взятого у пациента и помещенного на искусственную питательную среду, способствующую росту и размножению возбудителя заболевания. При исследовании можно выявить не только факт наличия возбудителя, но и его концентрацию. Таким образом можно исследовать, кроме уже перечисленного, спинно-мозговую жидкость (ликвор), мокроту, желчь, отделяемое из зева, носа, глаз, дыхательных путей, половых органов, ран. То есть высевать микроорганизмы можно с практически любого участка организма. Подобные методики удобны для нахождения и идентификации бактерий и грибов, вирусы обнаружить таким образом гораздо сложнее, что связано с особенностями биологии вирусов.

Бактериологические посевы позволяют не только определить типы микробов, провоцирующих то или иное заболевание, но и подобрать эффективные антибиотики (определить чувствительность микробов к ним), которые помогут выздоровлению. Только забор материала необходимо сделать до начала антибиотикотерапии. Назначать бактериологический посев могут как в поликлинике (например, всем известное исследование кала на дисбактериоз), так и в стационаре (например, при кишечных инфекциях, а также если биологический материал труднодоступен, как ликвор). После того как материал забирают у пациента, его помещают на специальные питательные среды, через 3–10 дней оценивают результаты. Распознать (идентифицировать) микроб специалисты его микробиологической лаборатории могут путем определения морфологических, культуральных, биохимических признаков. Морфологию (строение) «вредителя» изучают под микроскопом, культуральные свойства характеризуются потребностями, условиями и типом роста микроорганизмов на питательных средах. Биохимические признаки определяются набором ферментов, синтезируемых микробом в процессе жизнедеятельности. Также обращают внимание на пигменты, окрашивающие колонии микроорганизмов и питательные среды, например, золотистый пигмент образует золотистый стафилококк.

Виды анализов

Бактериологическое исследование крови

Показания: подозрение на заражение крови; длительно повышенная температура, причину которой не удается выяснить; подозрение на некоторые инфекционные заболевания (например, кишечные инфекции, эпидемический менингит, стафилококковые и стрептококковые инфекции). Взятие крови осуществляют в момент максимального подъема температуры (в этот период концентрация микроорганизмов в крови особенно высока), до приема антибиотиков (если диагноз еще не установлен) или после приема антибиотиков через 10–14 дней (чтобы проследить результаты лечения). Кровь берут у постели больного или в перевязочной и тут же засевают на питательные среды. Однократное исследование крови малорезультативно в случае обнаружения условно болезнетворных микроорганизмов, обитающих на коже человека, а при определенных условиях (при снижении защитных сил организма), способных вызвать заболевание, без проведения повторных исследований трудно понять истинность результатов. Поэтому могут быть проведены серии из 3 и более исследований за определенный промежуток времени. Утверждать, что в данном случае возбудителем является какой-либо микроорганизм, позволяет быстрое (в течение 48 часов) обнаружение микроорганизма, неоднократное выделение его из крови или одновременное выделение из других видов исследуемого материала (крови и мочи, крови и мокроты и т.п.), кроме того, его обнаружение одновременно на разных питательных средах.

Отделяемое, мазки из верхних дыхательных путей

Показания: воспалительные заболевания верхних дыхательных путей и воспаление легких без мокроты, диагностика инфекционных заболеваний дыхательных путей (дифтерии, коклюша, скарлатины), диагностика бактерионосительства при менингококковой, дифтерийной и стафилококковой инфекциях. Материал из носовых ходов забирают с помощью сухого стерильного тампона, а из зева – с помощью увлажненного стерильного ватного тампона. Мазки из носа и глотки берут разными тампонами. Материал из глотки и с миндалин забирают натощак до приема гигиенических процедур или не ранее чем через 3–4 часа после еды. При взятии мазков с задней стенки глотки и миндалин нельзя касаться тампоном языка, слизистой щек, зубов, поэтому родители должны создать условия для того, чтобы медицинской сестре было удобно работать с малышом – лучше рассказать заранее, что процедура будет очень короткой, зато удастся поймать микроб, живущий у малыша во рту, но для этого он должен открыть ротик и несколько секунд (на несколько счетов) не шевелиться.

Бактериолоическое исследование мочи

Показания: воспалительные заболевания почек и мочевого пузыря и контроль после лечения, диагностика инфекционных заболеваний (брюшного тифа, лептоспироза). Исследование мочи на флору проводится до начала антибиотикотерапии. В стерильную посуду собирают среднюю порцию свободно выпущенной мочи (3–5 мл). Средняя порция мочи меньше всего загрязнена микробами, которые могут быть на наружных половых органах, ее исследование дает более объективное представление о состоянии почек, мочевыводящих путей. Лучше всего использовать утреннюю мочу, содержащую наибольшее число бактерий. Перед взятием материала необходим тщательный туалет наружных половых органов. Мальчикам следует обнажить головку полового члена (если не было обрезания) и выпустить небольшую порцию мочи; затем выпустить порцию мочи в стерильный контейнер (последнюю часть не собирать), закрыть контейнер и передать в лабораторию. Девочкам вымыть половые органы, используя теплую мыльную воду, в направлении спереди назад; промыть половые органы еще раз теплой водой и вытереть стерильной салфеткой. Собрать среднюю порцию мочи в стерильный контейнер (он должен быть взят в лаборатории). Моча может храниться до начала исследования не более 1–2 часов при комнатной температуре и не более суток в холодильнике, так как имеется риск размножения бактерий и искажения результатов исследования.

Отделяемое ран

Показания: признаки гнойно-воспалительного процесса в ране. Взятие материала осуществляет врач. Кожу вокруг раны обрабатывают антисептиком, удаляют с помощью стерильной салфетки гной. Материал берут с помощью стерильного тампона. При наличии в ране дренажей (трубочек, по которым оттекает содержимое раны) отделяемое из них засасывают шприцем в количестве 1–2 мл и помещают в стерильную пробирку.

Бактериологическое исследование кала

Показания: диагностика кишечных инфекций, контроль при выписке больных с острыми кишечными инфекциями (дизентерия, сальмонеллез и т.д.) из стационара, диагностика хронических дисфункций кишечника, диагностика дисбактериоза кишечника, выявление бактерионосителей. Исследуемым материалом могут служить испражнения, полученные при естественной дефекации или с помощью специальных тампонов (петель). Для сбора материала путем естественной дефекации используют тщательно вымытые и лишенные следов дезинфицирующих средств судна или горшки. На дно судна, для защиты материала от следов дезинфектанта, можно поместить лист чистой бумаги. Пробу испражнений отбирают сразу после дефекации с помощью стерильной стеклянной палочки, проволочной петли, деревянного шпателя или специальной ложечки, вмонтированной в крышку стерильного контейнера, который можно получить в лаборатории. При наличии слизи, гноя, других включений нужно выбрать участки, содержащие эти примеси, но свободные от крови. Получение материала из прямой кишки с помощью ректальных тампонов (петель) осуществляется медсестрой. Ребенка просят лечь на бок с притянутыми к животу бедрами и ладонями развести ягодицы. Петля (тампон) вводится в задний проход на глубину 5–6 см. Материал собирают в пустую стерильную посуду или в пробирки с консервантом. Если консервант не применяется, то время до начала бактериологического исследования ни при каких условиях не должно превышать 2 часов. Обнаружение в испражнениях даже болезнетворных микроорганизмов не всегда свидетельствует о наличии заболевания, а может быть обусловлено бактерионосительством. Поэтому оценка результатов должна проводится с учетом проявлений заболевания. Для правильной оценки результатов рекомендуется проведение 2–3-кратных исследований с интервалом 1–2 дня. Диагностика дисбактериоза кишечника осуществляется на основании оценки качественных и количественных сдвигов в составе микрофлоры толстого кишечника. Следует отметить, что значение имеет не только состояние микробной флоры кишечника в данный конкретный момент времени, но и происходящие в кишечнике изменения. Поэтому для более точной оценки состояния кишечной микрофлоры исследования также необходимо повторить несколько раз. На достоверность полученного результата сильно влияет соблюдение сроков транспортировки материала. В ряде случаев, когда соблюдение этих сроков нереально, следует либо отказаться от определения численности бактерий, либо с осторожностью подходить к информации о снижении их количества.

Ликвор

Показания: подозрение на менингит (воспаление мягкой мозговой оболочки). Ликвор (спинно-мозговую жидкость) получают путем люмбальной пункции (получения спинно-мозговой жидкости из канала спинного мозга), реже при пункции боковых желудочков мозга (в этом случае спинно-мозговую жидкость получают из так называемых желудочков головного мозга, делая прокол за наружным слуховым проходом). Взятие ликвора проводит врач, эта процедура всегда проводится только в стационаре. Ликвор в норме стерилен, поэтому значимым может быть факт находки любого микроорганизма. У детей менингиту часто сопутствует бактериемия – наличие возбудителя в крови, поэтому проводят одновременное исследование крови и ликвора.

Результаты бактериологического исследования

Правильно прочитать результат исследования может только врач. В ряде случаев имеет значение не сам факт обнаружения тех или иных микроорганизмов, а их количество. Часто количество играет роль и для прогноза заболевания, характера лечения. Так, например, в мочевом пузыре в норме моча стерильна, но во время прохождения через нижнюю треть мочеиспускательного канала происходит ее контакт с нормальной микрофлорой, и о наличии патологического процесса говорят только в том случае, когда титр возбудителя (его количество) составляет более 10 4 кое/мл. Оценка количества микроорганизмов в раневом отделяемом важна для прогнозирования течения процесса. Установлено, что при уровне микробной обсемененности раны выше 105 кл (микробных клеток) на 1 г ткани (на 1 мл отделяемого) нагноение развивается даже в жизнеспособных тканях. В случае наличия в ране отмерших тканей, гематом, инородных тел развитие гнойного процесса возможно и при более низких уровнях обсемененности. Кроме того, при уровнях обсемененности раны более 105 кл на 1 г раневого отделяемого резко возрастает угроза развития сепсиса. По результатам обследования так или иначе изменяют схемы лечения. В заключение отметим, что результат любого анализа, в том числе и бактериологического, может быть ошибочным, поэтому врач может назначить подтверждающие или уточняющие исследования, например, полимеразную цепную реакцию (ПЦР) для определения ДНК возбудителя и др.