Содержание помещений бактериологической лаборатории. Бактериологическая лаборатория. Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места
Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой
Конспект урока
Медицина и ветеринария
ЗАНЯТИЕ 1 ТЕМА ЗАНЯТИЯ: Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой. УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТ...
ЗАНЯТИЕ 1
ТЕМА ЗАНЯТИЯ : Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой.
УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ : Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней. Ознакомиться с принципами классификации микроорганизмов. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов. Освоить бактериоскопический метод исследования и технику микроскопирования с иммерсионной системой.
ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ :
1. Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней.
2. Познакомиться с принципами классификации микроорганизмов.
3. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов.
4. Освоить технику микроскопирования с иммерсионной системой.
Устройство бактериологической лаборатории
Бактериологическая лаборатория предназначена для исследования материалов, содержащих возбудителей бактериальных инфекций, для определения санитарно-микробиологических показателей, контроля состояния и напряженности специфического иммунитета и других микробиологических исследований. Бактериологическая лаборатория должна размещаться в изолированных от других лабораторий помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Лаборатория должна иметь отдельный вход, гардероб и душевую. В состав бактериологической лаборатории должны входить следующие помещения:
Комната приема и регистрации материалов;
Боксированные помещения для микробиологических исследований;
Автоклавная;
Моечная;
Виварий.
Комнаты для микробиологических исследований оборудуют термостатами, холодильниками, центрифугами, весами, водяными банями, электромагнитными мешалками. На столах размещают необходимую аппаратуру. Работу с инфицированным материалом проводят в боксе с предбоксником . У входа в бокс должен быть коврик, пропитанный дезраствором. В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют мазки-отпечатки, проводят посевы микроорганизмов на питательные среды. Поэтому в боксе располагают столы, на которых размещают необходимые для работы инструменты: емкости с дезрастворами для использованной посуды, штативы для пробирок, пробирки и чашки Петри с питательными средами, стерильные пипетки, ступки и т. д. В предбокснике в биксах необходимо иметь стерильные халаты, шапочки, маски, а также в предбокснике должна быть сменная обувь. В предбокснике можно размещать термостаты, холодильники, центрифуги и другое оборудование. В боксах и предбоксниках ежедневно проводят влажную уборку, дезинфекционную обработку и облучение с помощью бактерицидных ламп в течение 30-40 минут перед началом работы и после работы.
В автоклавной необходимо иметь два автоклава: один автоклав для чистых материалов (для стерилизации посуды, питательных сред, инструментов); другой автоклав для инфицированных материалов (для обезвреживания инфицированных инструментов и материалов).
Моечная предназначена для мытья посуды. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют только после стерилизации. В ней размещают сушильные шкафы.
Виварием называется помещение, используемое для содержания лабораторных животных. В виварии необходимо иметь карантинное отделение, комнаты для экспериментальных и здоровых животных, помещения для мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и спецодежды, кухню для приготовления корма, кладовую, фуражную, трупосжигательную печь. Все помещения вивария должны быть изолированы друг от друга.
Правила работы в бактериологической лаборатории
Сотрудники лаборатории обязаны соблюдать следующие правила:
1. Работать разрешается в специальной одежде халате и шапочке. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, при необходимости надевают резиновые перчатки и очки. Обязательно меняют обувь.
2. Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнюю одежду на халат.
3. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.
4. Весь материал, поступающий в лабораторию на анализ, должен рассматриваться как инфицированный. Поэтому при распаковке материала необходимо соблюдать осторожность. Емкости следует обтирать снаружи дезинфицирующим раствором и ставить их на подносы или в кюветы.
5. В случае попадания инфицированного материала на халат, руки, стол, обувь необходимо провести дезинфекцию и сообщить об этом заведующему лабораторией.
6. Зараженный материал обязательно уничтожают автоклавированием. Инструменты, а также поверхность рабочего стола после работы дезинфицируют.
7. Запрещается выносить из лаборатории оборудование, инвентарь, материалы без предварительной их дезинфекции.
8. Пипетки, предметные и покровные стекла и другую посуду, бывшую в употреблении, обеззараживают, погружая в дезраствор.
9. По окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют. Культуры микроорганизмов, необходимые для дальнейшей работы, убирают на хранение в холодильник.
В бактериологической лаборатории ведется следующая документация:
1. Инвентарная книга музейных штаммов культур.
2. Журнал учета движения материала в лаборатории.
3. Журнал учета стерилизации и уничтожения инфицированного материала.
4. Журнал учета зараженных подопытных животных.
5. Журнал исследований (экспертиз).
Классификация микроорганизмов
Классификация - это распределение организмов на основе учета их общих признаков на группы или таксоны . Классификация основывается на внешних признаках организмов (фенотипе) и генетических особенностях организмов (генотипе).
В настоящее время м ир микроорганизмов подразделяют на следующие формы:
1. Неклеточные формы:
Прионы;
Вироиды;
Вирусы.
2. Клеточные формы:
2.1. Прокариоты:
Домен Bacteria :
Бактерии с тонкой клеточной стенкой (грамотрицательные);
Бактерии с толстой клеточной стенкой (грамположительные);
Бактерии без клеточной стенки (микоплазмы).
Домен Archaea :
Архебактерии.
2.2. Эукариоты:
Простейшие;
Грибы.
В основу классификации живого мира положен тип строения клетки эукариотический или прокариотический. Главными отличиями прокариотической (бактериальной) клетки от эукариотической являются: отсутствие следующих структур: оформленного ядра (то есть ядерной мембраны), внутриклеточных мембран, ядрышек, комплекса Гольджи, лизосом, митохондрий.
В классификации микробов используются следующие таксономические категории : царство, отдел, класс, порядок, семейство, род, вид. О сновной таксономической единицей является вид. Название микроорганизмам присваивается в соответствии с правилами Международного кодекса номенклатуры бактерий. Для обозначения видов бактерий принята двойная (бинарная) номенклатура , предложенная еще в XVIII веке Карлом Линнеем. Согласно номенклатуре, латинскими буквами сначала пишется название рода (родовое название), а затем - название вида (видовое название). Если микроорганизм идентифицирован только до рода, то вместо видового названия пишется слово sp . (species - вид). Родовую принадлежность микроба обозначает какой-либо морфологический признак или фамилия ученого, открывшего микроб, а видовую принадлежность обозначает либо вид колоний, либо среда обитания микроорганизма. Например, Escherichia coli указывает на то, что микроб открыл Т. Эшерих, а обитает микроб в кишечнике. Образование и применение научных названий микроорганизмов регламентируют “Международный кодекс номенклатуры бактерий”, “Международный кодекс ботанической номенклатуры” (грибы), “Международный кодекс зоологической номенклатуры” (простейшие) и решения Международного комитета по таксономии вирусов.
Бактерии обладают высокой изменчивостью. Для внутривидовой дифференциации бактерий, отличающихся по определенному признаку, используют понятие “вариант” (сокращенно «вар»). Выделяют варианты, отличающиеся по антигенным признакам (серовары ), варианты, устойчивые к бактериофагам (фаговары ), а также варианты, различающиеся по биохимическим (хемовары ), биологическим или культуральным признакам (биовары ).
В микробиологии используются специализированные термины: чистая культура, смешанная культура, штамм, клон.
Культура - это совокупность микроорганизмов, выращенных на плотной или жидкой питательной среде в условиях лаборатории. Культуру микроорганизмов, состоящую из особей одного вида называют чистой культурой . Смешанной культурой называют смесь микроорганизмов разных видов, выросших в питательной среде при посеве исследуемого материала или при попадании в питательную среду, засеянную одним видом микроба, других видов микроорганизмов из внешней среды.
Штамм (нем. stammen происходить) - это чистая культура определенного вида микроорганизма, выделенная из исследуемого материала, взятого в определенный момент из конкретного объекта.
Клон (греч. klon отводок) - это потомство (культура) одной материнской клетки (вирусной частицы) определенного вида микроорганизмов.
Принципы классификации микроорганизмов
Минимальный перечень данных, необходимых для описания бактерий, включает в себя следующие признаки.
1. Морфологические и тинкториальные свойства - величина, форма, клеток, наличие капсулы, спор, жгутиков, способность окрашиваться красителями.
2. Тип дыхания потребность в газообразном кислороде.
3. Биохимические свойства - способность ферментировать углеводы, расщеплять белки.
4. Антигенная структура наличие антигенов.
5. Чувствительность к бактериофагам.
6. Химический состав - содержание и состав углеводов, липидов, белков.
7. Генетическое родство с другими бактериями.
В микробиологии созданы определители для идентификации микроорганизмов: “Определитель бактерий и актиномицетов” Н.А. Красильникова (1949 г.), “Определитель микробов” Р.А. Циона (1948 г.) и “Определитель бактерий” Д.Х. Берджи. Наиболее распространенной является классификация американского бактериолога Д.Х. Берджи. Определитель Берджи систематизирует все известные бактерии на 4 отдела:
Отдел I . Gracilicutes (лат. gracilis - изящный, тонкий, cutis кожа) - виды с тонкой клеточной стенкой, окрашивающиеся грамотрицательно.
Отдел II . Firmicutes (лат. firmus - крепкий, cutis кожа) - бактерии с толстой клеточной стенкой, окрашивающиеся грамположительно.
Отдел III . Tenericutes (лат. tener - нежный, cutis кожа) - бактерии, не имеющие клеточной стенки микоплазмы.
Отдел IV . Mendosicutes (лат. mendosus - неправильный, cutis кожа) - архебактерии. В этот отдел включены метанобразующие, сероокисляющие, микоплазмоподобные, термоацидофильные и другие наиболее древние по происхождению бактерии.
Морфология бактерий
Бактерии невооруженным глазом не видны. Для их изучения используют световые и электронные микроскопы. Клетки бактерий измеряют в микрометрах (1 мкм равен 10 -3 мм), а элементы тонкого строения бактерий измеряют в нанометрах (1 нм равен 10 -3 мкм). Средние размеры бактерий составляют 0,5-3 мкм.
По форме клеток бактерии подразделяются на 3 основные группы:
Шаровидные формы или кокки;
Палочковидные формы;
Извитые формы.
Кокки имеют сферическую форму в виде правильного шара, эллипса, боба. В зависимости от взаимного расположения клеток после деления различают следующие виды кокков:
Микрококки делятся в разных плоскостях и располагаются одиночно, парами или беспорядочно;
Стафилококки делятся в различных плоскостях и располагаются гроздьями;
Диплококки делятся в одной плоскости, располагаются попарно;
Стрептококки делятся в одной плоскости, располагаются в виде цепочки;
Тетракокки делятся в двух взаимно перпендикулярных плоскостях, располагаются по четыре;
Сарцины делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и образуют правильные пакеты по 8-16 клеток.
Палочковидные бактерии имеют цилиндрическую форму с округлыми, заостренными или тупыми концами. Палочковидные бактерии подразделяются на 2 группы:
Бактерии не образующие спор палочки;
Бациллы - палочки, образующие споры. Палочки, у которых диаметр споры превышает ширину вегетативной клетки, называют клостридиями .
По размерам палочковидные бактерии распределяются на группы:
Мелкие до 1,5 мкм;
Средних размеров (1,5 3 мкм);
Крупные (более 3 мкм).
По форме концов выделяют:
Закругленные (кишечная палочка);
Обрубленные (возбудитель сибирской язвы);
Заостренные (каулобактеры);
Утолщенные (возбудитель дифтерии);
Расщепленные (бифидобактерии).
По взаимному расположению клеток :
Беспорядочно расположенные (сальмонеллы);
Попарно расположенные (диплобактерии);
Цепочками (стрептобактерии);
В виде хвороста (микобактерии туберкулеза);
В виде пачек сигарет (возбудитель лепры);
Под углом (возбудитель дифтерии).
Извитые бактерии объединяют:
Вибрионы - имеют цилиндрическую изогнутую форму, образуя 1/2-1/4 завитка спирали, по форме напоминают запятую;
Спириллы имеют форму спирально извитых палочек с 4-6 витками;
Спирохеты спирально извитые формы, у которых существуют 2 типа витков: первичные витки, образованные изгибами протоплазматического цилиндра, и вторичные витки, представляющие изгибы всего тела.
Методы определения вида микробов
Определение вида микроорганизмов проводится с использованием следующих методов исследования:
- бактериоскопический метод изучение микроорганизмов путем их микроскопирования в живом или окрашенном состоянии;
- бактериологический метод изучение характера роста микробов на плотных и в жидких питательных средах, определение ферментативной активности микробов, идентификация микробов (определение вида);
- серологический метод изучение антигенного строения микробов;
- биологический метод (экспериментальный) изучение патогенных свойств бактерий с использованием лабораторных животных;
- молекулярно-биологический метод изучение генетических особенностей микробов.
С помощью этих методов изучают следующие свойства микробов:
- морфологические свойства форма и размер бактерий;
Тинкториальные свойства отношение бактерий к красителям;
Культуральные свойства характер роста на питательных средах;
Биохимическая активность ферментация углеводов, белков и других соединений;
Антигенная структура бактерий;
Патогенность ;
Генетические особенности микробов.
Бактериоскопический метод исследования
Клетки микроорганизмов можно изучать как в живом состоянии (метод раздавленной капли и метод висячей капли), так и в фиксированном и окрашенном состоянии.
Метод раздавленной капли . На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля не должна выходить за края покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом х40. Метод раздавленной капли удобен для исследования подвижности бактериальных клеток, а также для изучения крупных микроорганизмов - плесневых грибов, дрожжей.
Метод висячей капли . Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят каплю бактериальной суспензии. Затем специальное предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазаны вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Препарат переворачивают покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или краев. Для микроскопии используют вначале сухой объектив х8, под увеличением которого находят края капли, а затем устанавливают объектив х40 и исследуют препарат.
Приготовление фиксированных препаратов . Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую бактериологической петлей вносят исследуемый материал и круговыми движениями петли распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром 1-1,5 см. Если исследуют жидкий материал, то его наносят на предметное стекло непосредственно петлей и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе.
Для фиксации используют физические и химические методы. Для фиксации мазка физическим методом предметное стекло медленно проводят 3 раза через пламя горелки. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и тканей фиксируют химическим методом путем погружения их на 5-20 минут в метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова и другие фиксирующие жидкости.
Для окрашивания микробов используют простые и сложные методы. При простом методе фиксированный мазок окрашивают каким-либо одним красителем, например, водным раствором фуксина (1-2 минуты) или метиленовым синим (3-5 минут), промывают водой, высушивают и микроскопируют. Сложные методы окрашивания включают последовательное использование нескольких красителей. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других.
Техника микроскопирования с иммерсионной системой
Для бактериоскопического исследования микроорганизмов наиболее часто применяют иммерсионные объективы. В отличие от сухих объективов, при работе с которыми между препаратом и линзой объектива находится воздух, при использовании иммерсионных объективов между линзой объектива и препаратом помещают жидкость, имеющую показатель преломления, близкий показателю преломления стекла. Роль такой жидкости выполняет иммерсионное масло, чаще всего - кедровое масло. Лучи света, проходя через однородную оптическую среду (стекло и масло), не меняют своего направления. Это позволяет существенно повысить четкость изображения. Иммерсионные объективы отличаются от сухих объективов по своему устройству (подвижная фронтальная линза) и по внешнему виду: на их оправе имеется черная круговая нарезка и выгравировано обозначение МИ (масляная иммерсия).
Для микроскопии с иммерсионным объективом требуется хорошее освещение объекта. Для этого используется дополнительная система линз, расположенная под предметным столиком конденсор. При подготовке микроскопа к работе конденсор с помощью специального винта перемещают вверх до упора. На окрашенный мазок наносят каплю иммерсионного масла и помещают стекло на предметный столик. Под визуальным контролем сбоку опускают объектив до соприкосновения с каплей. После погружения объектива в каплю масла вращением макрометрического винта определяют контуры объекта, а затем с помощью микрометрического винта устанавливают четкое изображение объекта.
После окончания микроскопии иммерсионный объектив поднимают, препарат убирают, а фронтальную линзу объектива протирают от остатков масла мягкой салфеткой. Затем объектив переводят на малое увеличение или в нейтральное положение и опускают конденсор.
Контрольные вопросы по теме занятия:
1. Устройство бактериологической лаборатории.
2. Правила работы в бактериологической лаборатории.
3. Принципы классификации микроорганизмов.
4. Формы бактериальных клеток.
5. Методы определения вида микробов.
6. Техника микроскопирования с иммерсионной системой.
Литература для подготовки к занятию:
Основная литература:
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. А.А. Воробьева. М., 2004.
Дополнительная литература:
1. Л.Б. Борисов. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2002.
2. О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. М., ГЭОТАР-МЕДИА, 2005.
3. Медицинская микробиология. Справочник. Под ред. В.И. Покровского и О.К. Поздеева. М., ГЭОТАР-МЕД, 1998.
А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать |
|||
| 122. | Завдання для контрольної роботи по курсу Основи системного аналізу об’єктів та процесів комп’ютеризації | 235.5 KB | |
| Контрольна робота складається з двох частин: теоретичної та практичної. I. В теоретичній частині потрібно дати розгорнуту відповідь на одне з наступних питань відповідно варіанту. II. В практичній частині необхідно розв’язати наступні задачі. | |||
| 123. | ПРИЙНЯТТЯ РІШЕНЬ В УМОВАХ НЕВИЗНАЧЕНОСТІ | 195.5 KB | |
| Якщо існування функцій розподілу ймовірностей, які характеризують степінь неповноти або неточності інформації про вихідні дані задачі прийняття рішень не гарантується, то таку ситуацію класифікують як прийняття рішень в умовах невизначеності. | |||
| 124. | АНАЛІЗ КОНФЛІКТНИХ СИТУАЦІЙ. ЕЛЕМЕНТИ ТЕОРІЇ ІГОР | 295.5 KB | |
| В теорії ігор супротивники – гравці. Кожен з гравців має деяку множину (скінченну або нескінченну) можливих дій (стратегій). Результати в грі задаються функціями, що залежать від стратегій кожного з гравців. Гра з двома гравцями, у якій виграш одного з гравців дорівнює програшу другого, називається грою з нульовою сумою. У такій грі достатньо задати результати у вигляді платежів одного з гравців. | |||
| 125. | Основы гражданской обороны. Структура и место в обществе | 186 KB | |
| Концепция современной войны значительно уменьшает вероятность ковровых бомбежек с массовым поражением населения и огромными разрушениями жилого фонда, что требовало эвакуации граждан в пригородную зону. | |||
| 126. | Основные понятия системного анализа и его критерии | 540.5 KB | |
| Системный анализ - наука, занимающаяся проблемой принятия решения в условиях анализа большого количества информации различной природы. Из определения следует, что целью применения системного анализа к конкретной проблеме является повышение степени обоснованности принимаемого решения, расширение множества вариантов, среди которых производится выбор, с одновременным указанием способов отбрасывания заведомо уступающим другим. | |||
| 127. | Системи керування Базами Даних | 61 KB | |
| Microsoft SQL Server - комерційна система керування базами даних, що розповсюджується корпорацією Microsoft. Мова, що використовується для запитів - Transact-SQL, створена спільно Microsoft та Sybase. Transact-SQL є реалізацією стандарту ANSI/ISO щодо структурованої мови запитів (SQL) із розширеннями. Використовується як для невеликих і середніх за розміром баз даних, так і для великих баз даних масштабу підприємства. Багато років вдало конкурує з іншими системами керування базами даних. | |||
| 128. | Свой сайт самостоятельно SQL. 10 минут на урок. | 51.75 MB | |
| Данная книга поможет вам в кратчайшие сроки освоить SQL - самый популярный язык баз данных. Начиная с простых запросов на выборку данных, автор урок за уроком рассматривает все более сложные темы, такие как использование операций объединения, подзапросы, хранимые процедуры, индексы, триггеры и ограничения. На изучение материала каждого урока вам потребуется не более 10 минут. Благодаря этой книге вы быстро научитесь самостоятельно составлять запросы к базам данных на языке SQL без чьей-либо помощи. | |||
| 129. | Организация труда на предприятии по изготовлению алюминия | 94.93 KB | |
| Расчет производственной программы электролизного цеха. Расчет эффективного фонда времени одного рабочего на год. Расчет амортизационных отчислений на содержание зданий и сооружений. Составление плановой калькуляции себестоимости одной тонны алюминия. | |||
| 130. | Обучение математическому моделированию как основному методу решения текстовых задач в курсе алгебры основной школы | 517 KB | |
| Психолого-педагогические основы обучения решению текстовых задач в курсе алгебры основной школы. Математическое моделирование – один из основных методов решения текстовых задач в основной школе. Методика обучения решению текстовых задач на основе моделирования задачной ситуации. | |||
Все микробиологические, биохимические и моле-кулярно-биологические исследования микроорганизмов про-водят в специальных лабораториях, структура и оборудование которых зависят от объектов исследования (бактерий, вирусов, грибов, простейших), а также от их целевой направленности (научные исследования, диагностика заболеваний). Изучение иммунного ответа и серодиагностика заболеваний человека и животных осуществляют в иммунологических и серологичес-ких (serum — сыворотка крови) лабораториях.
Бактериологические, вирусологические, микологические и серологические (иммунологические) лаборатории входят в со-став санитарно-эпидемиологических станций (СЭС), диагнос-тических центров и крупных больниц. В лабораториях СЭС выполняют бактериологические, вирусологические и серологи-ческие анализы материалов, полученных от больных и контак-тировавших с ними лиц, обследуют бактерионосителей и про-водят санитарно-микробиологические исследования воды, воз-духа, почвы, пищевых продуктов и т.д.
В бактериологических и серологических лабораториях боль-ниц и диагностических центров проводят исследования с целью диагностики кишечных, гнойных, респираторных и дру-гих инфекционных заболеваний, осуществляют микробиологи-ческий контроль за стерилизацией и дезинфекцией.
Диагностику особо опасных инфекций (чума, туляремия, сибирская язва и др.) проводят в специальных режимных ла-бораториях, организация и порядок деятельности которых строго регламентированы.
В вирусологических лабораториях диагностируют заболева-ния, вызванные вирусами (грипп, гепатит, полиомиелит и др.), некоторыми бактериями — хламидиями (орнитоз и др.) и риккетсиями (сыпной тиф, Ку-лихорадка и др.). При организации и оборудовании вирусологических лабораторий учитывают спе-цифику работы с вирусами, культурами клеток и куриными эмбрионами, требующую строжайшей асептики.
В микологических лабораториях проводят диагностику за-болеваний, вызываемых патогенными грибами, возбудителями микозов.
Лаборатории обычно размещаются в нескольких помещени-ях, площадь которых определяется объемом работ и целевым назначением.
В каждой лаборатории предусмотрены:
а) боксы для работы с отдельными группами возбудителей;
б) помещения для серологических исследований;
в) помещения для мойки и стерилизации посуды, приготов-
ления питательных сред;
г) виварий с боксами для здоровых и подопытных живот-
ных;
д) регистратура для приема и выдачи анализов.
Наряду с этими помещениями в вирусологических лабора-ториях имеются боксы для специальной обработки исследуе-мого материала и работы с культурами клеток.
Оборудование микробиологических лабораторий
Лаборатории снабжены рядом обязательных приборов и аппаратов.
1. Приборы для микроскопии: биологический иммерсион-ный микроскоп с дополнительными приспособлениями (ос-ветитель, фазово-контрастное устройство, темнопольный кон-денсор и др.), люминесцентный микроскоп.
2. Термостаты и холодильники.
3. Приборы для приготовления питательных сред, растворов и т.д.: аппарат для получения дистиллированной воды (дистил-лятор), технические и аналитические весы, рН-метры, аппара-тура для фильтрования, водяные бани, центрифуги.
4. Набор инструментов для манипуляций с микробами: бак-териологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.
5. Лабораторная посуда: пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флаконы, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки и др., аппарат для изготовления ватно-марлевых про-бок.
Крупные диагностические комплексы имеют автоматичес-кие анализаторы и компьютеризированную систему оценки полученной информации.
В лаборатории выделено место для окраски микроскопичес-ких препаратов, где находятся растворы специальных красите-лей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и др. Каждое рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой и емкостью с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми пита-тельными средами, химическими реактивами, диагностически-ми препаратами и другими материалами.
В крупных лабораториях имеются термостатные комнаты для массового выращивания микроорганизмов, постановки се-рологических реакций. Для выращивания, хранения культур, стерилизации лабораторной посуды и других целей используют следующую аппаратуру.
1. Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоян-ная температура. Оптимальная температура для размножения большинства патогенных микроорганизмов 37 "С. Термостаты бывают воздушными и водяными.
2. Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорга-низмов в анаэробных условиях.
3. С0 2 -инкубатор. Аппарат для создания постоянной тем-пературы и атмосферы определенного газового состава. Пред-назначен для культивирования микроорганизмов, требователь-ных к газовому составу атмосферы.
4. Холодильники. Используют в микробиологических лабора-ториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, вакцин, сывороток и прочих биологически актив-ных препаратов при температуре около 4 °С. Для хранения препаратов при температуре ниже О °С применяют низкотем-пературные холодильники, в которых поддерживается темпе-ратура —20 °С или —75 "С.
5. Центрифуги. Применяют для осаждения микроорганиз-мов, эритроцитов и других клеток, для разделения неоднород-ных жидкостей (эмульсии, суспензии). В лабораториях исполь-зуют центрифуги с различными режимами работы.
6. Сушилъно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Пред-назначен для суховоздушной стерилизации стеклянной лабо-раторной посуды и других жаростойких материалов.
7. Стерилизатор паровой (автоклав). Предназначен для сте-рилизации перегретым водяным паром (под давлением). В ми-кробиологических лабораториях используют автоклавы разных моделей (вертикальные, горизонтальные, стационарные, пере-носные).
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ, ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ, МИКОЛОГИЧЕСКИЕ, ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРИИ И ИХ ОБОРУДОВАНИЕ. УСТРОЙСТВО СОВРЕМЕННЫХ МИКРОСКОПОВ. МЕТОДЫ МИКРОСКОПИИ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ
Программа
1. Правила работы и организация микробиологических (бактериологических, вирусологических, микологи-ческих) лабораторий.
2. Основные приборы и оборудование микробиологичес-кой лаборатории.
3. Микроскопы и микроскопическая техника. Правила работы с иммерсионным микроскопом (объективами).
Демонстрация
1. Устройство и применение основных приборов и обо-рудования, используемого в микробиологических ла-бораториях: термостата, центрифуг, автоклава, су-шильного шкафа, инструментария и посуды.
2. Устройство биологического микроскопа. Различные ме-тоды микроскопии: темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная.
3. Препараты микробов (дрожжей и бактерий) при раз-личных методах микроскопии.
Задание студентам
1. Микроскопировать и зарисовать препараты дрожже-подобных грибов рода Candida , используя различные виды микроскопии.
Методические указания
Правила работы в микробиологических лабораториях .
Работу в микробиологической лаборатории медицинского учреждения проводят с возбудителями инфекционных заболеваний — пато-генными микроорганизмами.
Поэтому для предохранения от заражения персонал обязан строго соблюдать правила внутрен-него распорядка:
1. Все сотрудники должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход в лабораторию без халата категорически воспрещен. В необходимых слу-чаях работающие надевают на лицо маску из марли. Ра-бота с особо опасными микробами регламентируется спе-циальной инструкцией и проводится в режимных лабора-ториях.
2. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.
3. Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи сотрудников следует хранить в специально отведенном месте.
4. При случайном попадании инфицированного мате-риала на стол, пол и другие поверхности это место необ-ходимо тщательно обработать дезинфицирующим раство-ром.
5. Хранение, наблюдение за культурами микробов и их уничтожение должны производиться согласно специаль-ной инструкции. Культуры патогенных микробов реги-стрируют в специальном журнале.
6. По окончании работы руки следует тщательно вы-мыть, а при необходимости обработать дезинфицирующим раствором.
Микроскопы и методы микроскопии
Рис. 1.1. Микроскопы.
а — общий вид микроскопа "Биолам"; б — микроскоп МБР-1: 1 — основание микроскопа; 2 — предметный столик; 3 — винты для перемещения предмет-ного столика; 4 — клеммы, прижимающие препарат; 5 — конденсор; 6 — кронштейн конденсора; 7 — винт, укрепляющий конденсор в гильзе; 8 — рукоятка перемещения конденсора; 9 — рукоятка ирисовой диафрагмы кон-денсора; 10 — зеркало; 11 — тубусодержатель; 12 — рукоятка макрометричес-кого винта; 13 — рукоятка микрометрического винта; 14 — револьвер объек-тивов; 15 — объективы; 16 — наклонный тубус; 17 — винт для крепления ту-буса; 18 — окуляр.
Для микробиологических исследований используют не-сколько типов микроскопов (биологический, люминесцентный, электронный) и специальные методы микроскопии (фа-зово-контрастный, темнопольный).
В микробиологической практике применяют микроскопы отечественных марок: МБР-1, МБИ-2, МБИ-3, МБИ-6, "Био-лам" Р-1 и др. (рис. 1.1). Они предназначены для изучения формы, структуры, размеров и других признаков различных микробов, величина которых не менее 0,2—0,3 мкм.
Иммерсионная микроскопия
Применяется для увеличения разрешающей способности метода световой микроскопии . Раз-решающая способность системы светооптической микроско-пии определяется длиной волны видимого света и числовой апертурой системы. Числовая апертура показывает величину угла максимального конуса света, попадающего в объектив, и зависит от оптических свойств (преломляющей способности) среды между объектом и линзой объектива. Погружение объ-ектива в среду (минеральное масло, вода), имеющую высокий коэффициент преломления, близкий к таковому стекла, пре-пятствует рассеянию света от объекта.
Рис. 1.2. Ход лучей в иммерсионной системе, п — показатель преломления.
Рис. 1.3. Ход лучей в темнопольных конденсорах, а — параболоид-конденсор; б — кардиоид-конденсор; 1 — объектив; 2 — иммерсионное масло; 3 — препарат; 4 — зеркальная поверхность; 5 — диа-фрагма.
Таким образом достигается увеличение числовой апертуры и соответственно разре-шающей способности. Для иммерсионной микроскопии при-меняют специальные иммерсионные объективы, снабженные меткой (МИ — масляная иммерсия, ВИ — водная иммерсия). Предельная разрешающая способность иммерсионного микро-скопа не превышает 0,2 мкм. Ход лучей в иммерсионной системе показан на рис. 1.2.
Общее увеличение микроскопа определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. Например, уве-личение микроскопа с иммерсионным объективом 90 и окуля-ром 10 составляет: 90 x 10 = 900.
Микроскопия в проходящем свете (светлопольная микроско-пия) используется для изучения окрашенных объектов в фик-сированных препаратах.
Темнопольная микроскопия . Применяется для прижизненно-го изучения микробов в нативных неокрашенных препаратах. Микроскопия в темном поле зрения основана на явлении дифракции света при боковом освещении частиц, взвешенных в жидкости (эффект Тиндаля ). Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоид-конденсора, которые заменяют обычный конденсор в биологическом микроскопе (рис. 1.3). При этом способе освещения в объектив попадают только лучи, отраженные от поверхности объекта. В результате на темном фоне (неосвещенном поле зрения) видны ярко светя-щиеся частицы. Препарат в этом случае имеет вид, показанный на рис. 1.4, б (на вклейке).
Фазово-контрастная микроскопия . Предназначена для изуче-ния нативных препаратов. Фазово-контрастное приспособле-ние дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объек-ты. Свет проходит через различные биологические структуры с разной скоростью, которая зависит от оптической плотности объекта. В результате возникает изменение фазы световой волны, не воспринимаемое глазом. Фазовое устройство, вклю-чающее особые конденсор и объектив, обеспечивает преобра-зование изменений фазы световой волны в видимые изменения амплитуды. Таким образом достигается усиление различия в оптической плотности объектов. Они приобретают высокую контрастность, которая может быть позитивной или негатив-ной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изо-бражение объекта в светлом поле зрения, негативным — свет-лое изображение объекта на темном фоне (см. рис. 1.4; на вклейке).
Для фазово-контрастной микроскопии используют обыч-ный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устрой-ство КФ-1 или КФ-4 (рис. 1.5), а также специальные освети-тели.
Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Осно-вана на явлении фотолюминесценции.
Люминесценция — свечение веществ, возникающее под воздействием внешнего излучения: светового, ультрафиолето-вого, ионизирующего и др. Фотолюминесценция — люмине-сценция объекта под влиянием света. Если освещать люминес-цирующий объект синим светом, то он испускает лучи крас-ного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В результате возникает цветное изображение объекта.
Рис. 1.5. Фазово-контрастное устройство, а — фазовые объективы; б — вспомогательный микроскоп; в — фазовый кон-денсор.
Длина волны излучаемого света (цвет люминесценции) зависит от физико-хими-ческой структуры люминесцирующего вещества.
Первичная люминесценция биологических объектов (собст-венная, или биолюминесценция) наблюдается без предвари-тельного окрашивания за счет наличия собственных люминес-цирующих веществ, вторичная (наведенная) — возникает в ре-зультате окрашивания препаратов специальными люминесци-рующими красителями — флюорохромами (акридиновый оран-жевый, ауромин, корифосфин и др.). Люминесцентная микро-скопия по сравнению с обычными методами обладает рядом преимуществ: возможностью исследовать живые микробы и обнаруживать их в исследуемом материале в небольших кон-центрациях вследствие высокой степени контрастности.
В лабораторной практике люминесцентную микроскопию широко применяют для выявления и изучения многих микро-бов.
Электронная микроскопия . Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способнос-ти светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяют для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других суб-микроскопических объектов. Световые лучи в таких микроско-пах заменяет поток электронов, имеющий при определенных ускорениях длину волны около 0,005 нм, т.е. почти в 100 000 раз меньше длины волны видимого света. Высокая разре-шающая способность электронного микроскопа, достигаю-щая 0,1-0,2 нм, позволяет получить общее полезное увеличе-ние до 1 000 000.
Наряду с приборами "просвечивающего" типа используют сканирующие электронные микроскопы, обеспечивающие рель-ефное изображение поверхности объекта. Разрешающая спо-собность этих приборов значительно ниже, чем у электронных микроскопов "просвечивающего" типа.
Правила работы с микроскопом
Работа с любым световым микроскопом включает установку правильного освещения по-ля зрения и препарата и его микроскопию различными объек-тивами. Освещение может быть естественным (дневным) или искусственным, для чего используют специальные источники света — осветители разных марок.
При микроскопии препаратов с иммерсионным объективом следует строго придерживаться определенного порядка:
1) на приготовленный на предметном стекле и окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами;
2) повернуть револьвер до отметки иммерсионного объек-тива 90х или 10Ох;
3) осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла;
4) установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта;
5) провести окончательную фокусировку препарата микро- метрическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота.
Нельзя допускать соприкосновения объектива с пре-
паратом, так как это может повлечь поломку покровного стек-ла или фронтальной линзы объектива (свободное расстояние иммерсионного объектива 0,1—1 мм).
По окончании работы микроскопа необходимо удалить мас-ло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый объектив 8х.
Для темнопольной и фазово-контрастной микроскопии ис-пользуют нативные препараты ("раздавленная" капля и др., см. тему 2.1); микроскопируют с объективом 40х или специальным иммерсионным объективом с ирис-диафрагмой, позволяющей регулировать численную апертуру от 1,25 до 0,85. Толщина предметных стекол не должна превышать 1 — 1,5 мм, покров-ных — 0,15—0,2 мм.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ - научно-практическое учреждение, выполняющее бактериологические, иммунологические и другие микробиологические исследования. В соответствии с дифференцированием микробиологии вообще и бактериологии как одной из ее отраслей существуют бактериологические лаборатории, имеющие разнообразные задачи и функции. Клинико-диагностические бактериологические лаборатории при больницах проводят исследования, необходимые для постановки или уточнения диагноза инфекционного заболевания, контролирующие эффективность лечения.
Специализация бактериологических лабораторий при больницах определяется профилем больницы (острые инфекционные заболевания, детские инфекционные заболевания, венерические заболевания, туберкулез и пр.). Бактериологические лаборатории при санитарно-эпидемиологических станциях, как и клинические лаборатории, занимаются диагностической работой, обслуживая больницы, не имеющие собственных лабораторий, проводят профилактическое обследование населения и санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов и воды.
Кроме медицинских, существует широкая сеть ветеринарных бактериологических лабораторий, выполняющих диагностические и профилактические исследования инфекционных заболеваний у животных (см. Ветеринарная лаборатория). Узкоспециализированными являются бактериологические лаборатории, выполняющие контрольные функции, как, например, бактериологические лаборатории при водопроводных станциях, контрольные лаборатории на предприятиях, выпускающих вакцины, сыворотки и другие бактерийные препараты. Специальные бактериологические лаборатории организованы при дезинфекционных учреждениях. Их задачей является бактериологический контроль качества проведенной дезинфекции. Наряду с бактериологическими лабораториями медицинского и ветеринарного профиля существуют специализированные бактериологические лаборатории, обслуживающие нужды пищевой промышленности (винодельческие, хлебопекарные, пивоваренные и прочие предприятия), сельского хозяйства и пр. В отличие от перечисленных бактериологических лабораторий, решающих практические задачи, в структуре соответствующих научно-исследовательских институтов предусмотрены бактериологические лаборатории разных профилей, предназначенные для решения различных исследовательских задач. Бактериологические лаборатории могут быть стационарными и передвижными. Последние используются для санитарно-противоэпидемического обслуживания воинских частей, а также в экспедиционных, полевых условиях (см. Лаборатория , в военно-полевых условиях). Кроме передвижных, в войсках имеются и стационарные лаборатории. Специфика исследований, проводимых в бактериологических лабораториях, обусловливает структуру лабораторий и режим работы в них.
Основным требованием, предъявляемым к бактериологическим лабораториям и вытекающим из специфики ее работы, является создание условий, обеспечивающих выполнение исследований в максимально стерильных условиях и гарантирующих персонал и окружающих от возможного заражения. Структура бактериологической лаборатории включает: собственно лабораторию и ряд дополнительных к ней подразделений. К ним относятся: средоварня, моечная, препараторская, стерилизационная и виварий (см.). Перечисленные подразделения как самостоятельные структурные единицы входят в состав крупных бактериологических лабораторий. В небольших бактериологических лабораториях виварий и специальная препараторская отсутствуют, а средоварня и стерилизационная могут быть объединены в одном помещении.
Устройство и оборудование
Рис. 5. Стеклянные шпатели. Рис.6. Шпатель из платиновой проволоки.
Помещение бактериологических лабораторий должно быть светлым и достаточно просторным. Стены должны быть выкрашены масляной краской, а пол - не иметь щелей. Окна лаборатории следует ориентировать на север или северо-запад. При ориентировке на юг окна завешивают белыми шторами. В бактериологической лаборатории должна быть умывальная раковина или умывальник, над которыми на полке помещается бутыль с раствором для дезинфекции рук. Рабочий стол бактериолога, по возможности, располагают на расстоянии 1 м от окна и покрывают линолеумом или стеклом. На столе помещают газовую горелку (при отсутствии газовой - спиртовую). Обязательным оборудованием рабочего места является банка для пипеток с дезинфицирующим раствором (3% раствор карболовой к-ты), закрывающийся фарфоровый или стеклянный сосуд для ваты, колодка - держатель для бактериальной петли, набор бактериальных стандартов, штативов для пробирок, эмалированные кюветы, пинцеты, ножницы и скальпель, чистые предметные стекла с лунками и без них, а также покровные стекла. Обычно используют предметные стекла размером 26 X X 76 мм и толщиной 1 - 1,2 мм, покровные стекла 18 х 18 или 20 х 20 мм. Бактериологическая лаборатория должна быть снабжена металлическими подносами для переноса чашек Петри, оцинкованными ведрами или баками для сброса инфицированной посуды или инвентаря. Микроскопы хранят в футляре или под стеклянным колпаком. Рабочий стол не должен быть загроможден лишними предметами. Обычно в бактериологической лаборатории оборудуют дополнительный небольшой стол для окраски фиксированных препаратов. На таком столе располагают: набор необходимых красителей и реактивов в колодке с пипетками и резиновыми баллончиками (рис. 1), эмалированный кювет или кристаллизатор с подставкой для препаратов, проволочный пинцет или пинцет Корне (рис. 2) для фиксации предметных стекол, листы фильтровальной бумаги для удаления жидкости с промытых препаратов, промыватель (рис. 3) или бутыль с водой. Бактериологическая лаборатория оснащается разнообразной посудой, необходимой для проведения исследований. Кроме обычной химической посуды (цилиндры, колбы, мензурки, мерные пипетки и пр.), необходима специальная, предназначенная для бактериологических и иммунологических анализов посуда: 1) стеклянные чашки Петри, используемые для выращивания бактерий на плотных средах и получения изолированных бактериальных колоний; 2) бактериальные матрацы (рис. 4) - плоские склянки (размером 22 x 17 x 5 см), которые используются для выращивания большого количества бактерий; 3) пробирки Ру с перетяжкой для выращивания бактерий на косяках картофеля; 4) вассермановские пробирки длиной 90 мм и внутренним диаметром 9-10 мм для постановки реакции связывания комплемента и реакции агглютинации; 5) преципитационные пробирки длиной 90 мм и диаметром 3-5 мм для постановки реакции преципитации; 6) бактериальные пробирки, служащие для выращивания бактерий на твердых и жидких питательных средах; 7) пастеровские пипетки, используемые для посевов жидких материалов, разведения жидкостей капельным способом, нанесения красителей и пр.; 8) пипетки Мора или пипетки с шарообразным расширением в средней части для засева инфицированного жидкого материала, а также автоматические пипетки или пипетки с резиновыми грушами, исключающие насасывание материала ртом. Для выращивания культур в жидких питательных средах, хранения и розлива питательных сред, реактивов и пр. применяется обычная лабораторная посуда. Посуда, используемая в бактериологической лаборатории, должна быть предварительно выщелочена, для чего ее обычно кипятят в 1-2% растворе соляной кислоты. Дезинфекцию бактериологической посуды, в которой культивируют микробы, следует осуществлять только при помощи высокой температуры без применения каких-либо дезинфицирующих средств, так как присутствие последних даже в виде следов может в дальнейшем затормозить развитие микробов. Посевы микроорганизмов в бактериологической лаборатории производят с помощью бактериологических петель, стеклянных или платиновых шпателей (рис. 5 и 6). Выращивание бактерий осуществляется в воздушном термостате (см.), а в крупных бактериологических лабораториях - в специальных термостатных комнатах.
При необходимости точного контроля температуры и относительно кратковременном выращивании бактерий или при постановке иммунологических реакций удобно использовать водяные ультратермостаты. Каждая бактериологическая лаборатория, где занимаются исследованием анаэробов, должна быть снабжена анаэростатом (см.), эксикаторами и вакуумными насосами для удаления воздуха. Последние используются также при проведении фильтрования. Для достижения наилучших асептических условий, необходимых при проведении посевов, выделении или пересеве культур, бактериологические лаборатории оснащают специальными застекленными боксами с предбоксниками. В боксе имеются газовая горелка, сосуд с дезинфицирующим раствором, а там, где возможно, бактерицидная увиолевая лампа. В случае отсутствия стационарного бокса при проведении некоторых работ, требующих высокой степени асептики, можно пользоваться переносным настольным боксом (см. Боксы, микробиологические).
Рис. 7. Автоматический счетчик колоний с телевизионным контрольным приспособлением: 1 - чашка Петри с выросшими колониями; 2 - электронное табло с цифрами, указывающими количество колоний в чашке Петри; 3 - телеэкран для наблюдения за увеличенным изображением колоний, выросших в чашке Петри.
Бактериальные культуры, лечебные и диагностические сыворотки, фаги и другие субстраты биологического характера (сыворотки, растворы пептонов и пр.) хранят в холодильнике. Бактериальные культуры полагается сохранять в запаянных пробирках или ампулах, для чего в бактериологических лабораториях необходимо иметь горелку для запаивания или обычную паяльную лампу. Обязательной принадлежностью любой бактериологической лаборатории является микроскоп (см.). Для большинства исследований используют микроскоп МБИ-3 и осветители. Научно-исследовательские бактериологические лаборатории оснащены также фазово-контрастными, люминесцентными и электронными микроскопами. Для количественного учета колоний бактерий, выросших на чашках Петри, используют счетчики разных систем. Одним из таких счетчиков является автоматический счетчик со сканирующим устройством и телевизионным контрольным приспособлением, позволяющим подсчитывать до 500 чашек в час (рис. 7). Важными элементами оборудования бактериологических лабораторий являются аппараты для встряхивания, используемые в тех случаях, когда необходимо в течение определенного времени обеспечить перемешивание и встряхивание материала (дефибринирование крови, гомогенизация материала и пр.). Для осаждения плотных частиц (микробные клетки, клетки тканей, взвесь исследуемого материала), находящихся в жидкости, используют центрифуги (см.). Для проведения большинства исследований наиболее часто применяют центрифуги, вращающиеся со скоростью 3000 - 3500 об/мин. При отсутствии электрических центрифуг пользуются центрифугами с ручным приводом.
Деятельность бактериологических лабораторий во многом зависит от соблюдения основного требования - работы в асептических условиях со стерильными объектами (инструменты, питательные среды, посуда). Поэтому в оснащении бактериологических лабораторий значительное место занимает аппаратура для стерилизации (см.). В каждой бактериологической лаборатории имеется автоклав (см.), аппарат Коха, печь Пастера (см. Пастера печь), аппарат для свертывания сыворотки. Для стерилизации кипячением применяют обычные стерилизаторы (см.), нагреваемые от электрической сети или другими средствами.
Для стерилизация жидких субстратов, изменяющихся при воздействии температуры, используют бактериальные фильтры (см.). Высушивание увлажняемых объектов (посуда, инструменты) после стерилизации паром или под давлением производят в сушильных шкафах (см.). Оснащение бактериологических лабораторий, необходимое для приготовления наиболее употребительных питательных сред, кроме указанной аппаратуры, включает приспособления для розлива сред, наборы реактивов и посуды для проведения некоторых химических анализов (определение аминного азота, триптофана, хлоридов и пр.), а также приборы и реактивы для определения pH среды; универсальный индикатор, индикаторы и компаратор Михаэлиса или потенциометр.
Работа с животными в бактериологических лабораториях проводится в специальном помещении - виварии. В собственно бактериологических лабораториях опыты с животными не допускаются. Для проведения основных работ с животными (взятие крови, постановка биологических проб, диагностических реакций и пр.) необходимо иметь: весы для взвешивания мышей, свинок и кроликов, станки или приспособления для их фиксации (рис. 8), набор шприцев, номера для метки животных (или красители), депиляторы.
Специфика бактериологической работы определяет особенно высокие требования к чистоте помещений бактериологических лабораторий. Особое значение имеет чистота воздуха, отсутствие в нем пыли. Уборку помещений бактериологических лабораторий лучше производить в конце рабочего дня или за несколько часов до начала работы, так как пыль, поднятая в воздух при уборке, повышает содержание в нем микробов и затрудняет возможность стерильной работы. Целесообразно после уборки помещений перед работой подвергнуть их облучению увиолевыми бактерицидными лампами в течение 0,5-1 часа. В целях профилактики внутрилабораторного заражения и возможности распространения инфекции при работе в бактериологических лабораториях необходимо выполнять следующие основные правила: 1) все лица, находящиеся в лаборатории, должны быть в халатах; 2) не допускаются излишние разговоры и хождения; 3) каждый работник должен пользоваться только закрепленным за ним рабочим местом; 4) в бактериологической лаборатории запрещается прием пищи и курение; 5) при работе с заразным материалом необходимо пользоваться инструментами (пинцетами, иглами, крючками) и ни в коем случае не прикасаться к нему руками; весь инвентарь, находившийся в контакте с заразным материалом, подлежит стерилизации или уничтожению; 6) при отсасывании жидкого материала рекомендуется пользоваться резиновыми грушами; пипетки должны быть закрыты ватными пробками; 7) переливание инфицированных жидкостей из сосуда в сосуд производят над лотком или кристаллизатором, наполненным дезинфицирующей жидкостью; 8) всю работу, связанную с посевами, пересевами, выделением культур и приготовлением препаратов из инфицированного материала, проводят у горелки, обжигая при этом края пробирок, петли, шпатели и пр.; 9) пробирки, колбы, флаконы и пр., куда в процессе работы помещается инфицированный материал, немедленно надписываются с указанием характера материала, названия и номера культуры и даты; 10) если заразный материал попал на окружающие предметы, необходимо немедленно провести тщательную дезинфекцию: залить это место дезинфицирующим раствором, а затем, если это возможно, прожечь тампоном с горящим спиртом; 11) предметы и материалы, инфицированные во время работы, регистрируют, собирают в баки или ведра, закрывают, запечатывают и в тот же день стерилизуют; 12) культуры, если это необходимо, хранят в агаровых столбиках под маслом в запаянных пробирках с этикетками; 13) регистрация и учет всех культур, а также зараженных в ходе работы животных ведется в журнале по специальной форме.
В бактериологической лаборатории определяют вид инфекции, вызвавший то или иное заболевание организма. Для этого производят посевы крови, мочи, спинно-мозговой жидкости и других жидкостей организма на различные питательные среды. Иногда делают посевы с кожи, слизистой оболочки носа и глотки. Глазные врачи, поставив диагноз "конъюнктивит", тоже нередко направляют больного на бактериологическое исследование.
При подозрении на острый или хронический конъюнктивит исследование помогает уточнить диагноз и определить вид бактерий, вызвавших конъюнктивит. Исследование начинается с того, что с помощью специального приспособления берут содержимое конъюнктивального мешка и делают посев на специальный бульон, а затем - на питательную среду. Через 24-48 ч на питательной среде вырастают колонии бактерий. После специальной окраски их исследуют под микроскопом и определяют вид микроорганизмов, обитающих на конъюнктиве. Это чаще всего бактерии, реже - другие микроорганизмы (грибы, амебы).
Для решения вопроса о применении наиболее эффективного антибиотика определяют чувствительность болезнетворных бактерий к лекарственным веществам.
В заключение приведем несколько цифр и еще раз напомним о том, как вы можете защититься от инфекции.
Помните, что земля, вода и воздух населены микроорганизмами. При каждом движении, мигании, вздохе мы контактируем с ними. Наши слизистые оболочки не допускают их попадания в жизненно важные органы. Обратите внимание на интересные факты, собранные одним из любителей микробиологии.
В 1 г уличной пыли содержится около 2 млн микроорганизмов, они попадают в воздух с земли. Наибольшее число микробов находится в верхних 50 см почвы.
В водных бассейнах содержится от 5 до 10000 бактерий в 1 кв. см, а в городской реке - 23000 в 1 кв. см.
А вот данные о количестве микроорганизмов в 1 кв. м воздуха, окружающего нас: в воздухе в лесу или парке - от 100 до 1000 микробов в 1 кв. м, в морском воздухе в 100 км от берега - только 0,6, на высоте 2000 м - 3.
Совсем другая картина наблюдается на центральной улице среднего города - 3500 микробов в 1 кв. м, в новом доме - 4500, в старом - 36000, в больнице - 79000, в общежитии - 40000.
Эти цифры говорят сами за себя. Среди микроорганизмов - вирусы, бактерии, споры грибов и плесени. Кроме того, сама пыль по химическому составу, особенно на городских улицах, в квартирах, на различных производствах содержит вредные для организма химические и физические примеси. Наши слизистые оболочки и кожа не всегда могут справиться с такой нагрузкой без нашей помощи. Для того чтобы не болеть, нужно помнить о правилах профилактики.
ИНСТРУКЦИЯ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ №1
ТЕМА: «Виды микробиологических лабораторий. Устройство и оборудование бактериологической лаборатории. Правила работы в лаборатории.
Задачи:
· Изучить виды микробиологических лабораторий
· Изучить устройство и оборудование бактериологической лаборатории
· Изучить правила работы в бактериологической лаборатории
· Изучить виды патологического материала и правила его доставки в лабораторию
· Повторить учебную информацию о микробиологических методах исследования
ЗАДАНИЕ № 1
Изучите виды микробиологических лабораторий.
Бактериологические лаборатории организуются в инфекционных больницах, клиниках, санитарно-эпидемиологических станциях. Задача медицинской бактериологической лаборатории - диагностика инфекционных болезней. В бактериологическую лабораторию медицинский персонал приносит правильно взятый у больного или обследуемого патологический материал /мокроту, мочу, рвотные массы, мазок из зева, кровь, спинномозговую жидкость, желчь, промывные воды бронхов и т.д./, его исследуют и определяют, какой возбудитель находится в патологическом материале, т.е. проводят выделение возбудителя. Кроме этого в серологических лабораториях определяют ответ организма на внедрение микроорганизмов /проводится серологическая диагностика инфекционных заболеваний/. Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования. В специальных санитарно-бактериологических лабораториях проводят исследования с целью выявления микробного загрязнения внешней среды
/ воды, почвы, воздуха/ и различных объектов внешней среды.
По своему назначению различают бактериологические, вирусологические, иммунологические и специально предназначенные для диагностики особо опасных инфекций лаборатории.
Заполните таблицу в тетради
ЗАДАНИЕ № 2
Изучите устройство микробиологической лаборатории.
Микробиологическая лаборатория обязательно размещается в изолированном помещении. В лаборатории должно быть несколько помещений.
Лаборатория оборудуется приточно-вытяжной вентиляцией и противопожарными устройствами.
Помещения лабораторий должны быть удобными для влажной уборки и дезинфекции, в частности, панели окрашиваются светлой масляной краской, полы покрываются линолеумом, а столы – специальной эмалью.
Основным оборудованием лаборатории являются микроскопы, термостаты, холодильники, аппараты для стерилизации (автоклав, сухожаровой шкаф, свертыватель), центрифуга и дистиллированный аппарат.
В вирусологических лабораториях создают боксы с предбоксниками. Кроме обычного оборудования их оснащают ультратермостатом, центрифугой с охлаждением для очистки и концентрации вирусов, холодильником для их хранения при температуре - 20º -70ºС, аппаратом для вакуумного высушивания материалов.
Иммунологические лаборатории оснащают посудой, приборами, реактивами, диагностикумами и аллергенами для серологических реакций.
Персонал микробиологических лабораторий обеспечивают халатами, косынками и шапочками, марлевыми масками, клеенчатыми передниками, нарукавниками, резиновыми перчатками, противочумными костюмами для индивидуальной защиты. В процессе микробиологических исследований необходимо соблюдать строгий санитарно-противоэпидемический режим, исключающий внутрилабораторное заражение. При случайном попадании исследуемого материала или культуры микроорганизмов на руки, стол, халат или обувь следует немедленно провести их дезинфекцию.
После окончания работы питательные среды с посевами ставят в термостат, музейные культуры – в сейфы-холодильники. Столы протирают дезинфицирующим раствором и тщательно моют руки.
После вскрытия инфицированных животных инструменты и шприцы подвергаются стерилизации, отработанные материалы и трупы сжигают или автоклавируют.
Основные помещения лаборатории:
1. Лабораторные комнаты – предназначены для проведения микробиологических исследований. Это светлая комната, окрашенная масляной краской. В ней размещены рабочие столы, холодильник /в нем держат некоторые питательные среды, диагностические препараты, кровь, желчь и др./.
2. Термостатная комната. В ней находятся термостаты /аппараты, в которых выращивают микроорганизмы, температура в них должна быть 37 0 С, она ежедневно регистрируется, центрифуги /используются для отделения плотных частиц от жидкости/.
3. Материальная комната в ней находятся шкафы /в них держат штативы, сухие питательные среды, реактивы, приборы/ и др.
Около раковины должен находиться сосуд с дезинфицирующим раствором для обработки рук и аптечка с набором предметов для оказания первой медицинской помощи.
4. Помещение для приготовления питательных сред – в нем приготавливают питательные среды.
5. Моечная – комната для мытья и обработки посуды.
6. Стерилизационная – в ней находятся приборы для стерилизации чистой посуды, питательные среды, автоклавы, сушильный шкаф.
7. Бокс – строго изолированное помещение для проведения микробиологической работы в условиях, требующих особой стерильности. Обеззараживание воздуха проводят с помощью бактерицидных ламп. В бокс подается обеззараженный воздух. В бокс входят через предбоксник, в котором переодеваются: надевают халат, тапочки, шапочку, маску и переходят в бокс через вторую дверь. В боксе не разговаривают и избегают лишних движений.
8. Регистратура – в ней регистрируют поступивший патологический материал и результат исследования.
9. Виварий – помещение для содержания экспериментальных животных.